Hvala vam što ste posjetili Nature.com. Verzija preglednika koju koristite ima ograničenu podršku za CSS. Za najbolje rezultate preporučujemo korištenje novijeg preglednika (ili onemogućavanje načina kompatibilnosti u Internet Exploreru). U međuvremenu, kako bismo osigurali kontinuiranu podršku, prikazivat ćemo stranicu bez stilova i JavaScripta.
Uspostavljanje životinjskih modela modičnih promjena (MC) važna je osnova za proučavanje MC. Pedeset i četiri novozelandska bijela kunića podijeljena su u skupinu s lažnom operacijom, skupinu s implantacijom mišića (ME skupina) i skupinu s implantacijom nucleus pulposusa (NPE skupina). U NPE skupini, intervertebralni disk je eksponiran anterolateralnim lumbalnim kirurškim pristupom, a igla je korištena za punkciju tijela kralješka L5 blizu završne ploče. NP je izvučen iz intervertebralnog diska L1/2 štrcaljkom i ubrizgan u njega. Bušenje rupe u subhondralnoj kosti. Kirurški postupci i metode bušenja u skupini s implantacijom mišića i skupini s lažnom operacijom bili su isti kao i u skupini s implantacijom NP. U ME skupini, komad mišića je postavljen u rupu, dok u skupini s lažnom operacijom ništa nije postavljeno u rupu. Nakon operacije provedeno je MRI skeniranje i molekularno biološko testiranje. Signal u NPE skupini se promijenio, ali nije bilo očite promjene signala u skupini s lažnom operacijom i ME skupini. Histološko promatranje pokazalo je da je na mjestu implantacije uočena abnormalna proliferacija tkiva, a ekspresija IL-4, IL-17 i IFN-γ bila je povećana u NPE skupini. Implantacija NP u subhondralnu kost može formirati životinjski model MC-a.
Modic promjene (MC) su lezije završnih ploča kralježaka i susjedne koštane srži vidljive na magnetskoj rezonanciji (MRI). Prilično su česte kod osoba s pridruženim simptomima1. Mnoge studije naglasile su važnost MC zbog njezine povezanosti s bolovima u donjem dijelu leđa (LBP)2,3. de Roos i sur.4 i Modic i sur.5 neovisno su prvi opisali tri različite vrste subhondralnih signalnih abnormalnosti u koštanoj srži kralježaka. Modic promjene tipa I su hipointenzivne na T1-ponderiranim (T1W) sekvencama i hiperintenzivne na T2-ponderiranim (T2W) sekvencama. Ova lezija otkriva fisurne završne ploče i susjedno vaskularno granulacijsko tkivo u koštanoj srži. Modic promjene tipa II pokazuju visoki signal i na T1W i na T2W sekvencama. U ovoj vrsti lezije može se naći destrukcija završne ploče, kao i histološka masna zamjena susjedne koštane srži. Modic promjene tipa III pokazuju nizak signal u T1W i T2W sekvencama. Uočene su sklerotične lezije koje odgovaraju završnim pločama6. MC se smatra patološkom bolešću kralježnice i usko je povezan s mnogim degenerativnim bolestima kralježnice7,8,9.
Uzimajući u obzir dostupne podatke, nekoliko je studija pružilo detaljan uvid u etiologiju i patološke mehanizme MC-a. Albert i sur. sugerirali su da MC može biti uzrokovan hernijacijom diska8. Hu i sur. pripisali su MC teškoj degeneraciji diska10. Kroc je predložio koncept „unutarnje rupture diska“, koji navodi da ponavljajuće traume diska mogu dovesti do mikropukotina u završnoj ploči. Nakon stvaranja pukotine, uništavanje završne ploče od strane nucleus pulposusa (NP) može izazvati autoimuni odgovor, što dalje dovodi do razvoja MC11. Ma i sur. dijelili su slično mišljenje i izvijestili da autoimunost izazvana NP-om igra ključnu ulogu u patogenezi MC12.
Stanice imunološkog sustava, posebno CD4+ T pomoćnički limfociti, igraju ključnu ulogu u patogenezi autoimunosti13. Nedavno otkrivena Th17 podskupina proizvodi proinflamatorni citokin IL-17, potiče ekspresiju kemokina i stimulira T stanice u oštećenim organima da proizvode IFN-γ14. Th2 stanice također igraju jedinstvenu ulogu u patogenezi imunoloških odgovora. Ekspresija IL-4 kao reprezentativne Th2 stanice može dovesti do teških imunopatoloških posljedica15.
Iako su provedene brojne kliničke studije o MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, još uvijek nedostaju prikladni eksperimentalni modeli na životinjama koji mogu oponašati proces MC koji se često javlja kod ljudi i koji se mogu koristiti za istraživanje etiologije ili novih tretmana poput ciljane terapije. Do danas je objavljeno samo nekoliko životinjskih modela MC koji proučavaju temeljne patološke mehanizme.
Na temelju autoimune teorije koju su predložili Albert i Ma, ova je studija uspostavila jednostavan i reproducibilan model MC kod zečeva autotransplantacijom NP u blizini izbušene završne ploče kralješka. Drugi ciljevi su promatranje histoloških karakteristika životinjskih modela i procjena specifičnih mehanizama NP u razvoju MC. U tu svrhu koristimo tehnike poput molekularne biologije, magnetske rezonancije i histoloških studija za proučavanje progresije MC.
Dva zeca su uginula od krvarenja tijekom operacije, a četiri zeca su uginula tijekom anestezije tijekom snimanja magnetskom rezonancom. Preostalih 48 zečeva je preživjelo i nije pokazivalo znakove ponašanja ili neuroloških znakova nakon operacije.
Magnetska rezonancija (MR) pokazuje da je intenzitet signala ugrađenog tkiva u različitim rupama različit. Intenzitet signala tijela kralješka L5 u NPE skupini postupno se mijenjao 12, 16 i 20 tjedana nakon umetanja (T1W sekvenca pokazala je nizak signal, a T2W sekvenca pokazala je miješani signal plus nizak signal) (slika 1C), dok su MRI prikazi druge dvije skupine ugrađenih dijelova ostali relativno stabilni tijekom istog razdoblja (slika 1A, B).
(A) Reprezentativne sekvencijalne magnetske rezonancije lumbalne kralježnice zečeva u 3 vremenske točke. Na slikama skupine s lažnom operacijom nisu pronađene abnormalnosti signala. (B) Karakteristike signala tijela kralješka u ME skupini slične su onima u skupini s lažnom operacijom i nije uočena značajna promjena signala na mjestu ugradnje tijekom vremena. (C) U NPE skupini, nizak signal je jasno vidljiv u T1W sekvenci, a miješani signal i nizak signal jasno su vidljivi u T2W sekvenci. Od razdoblja od 12 do 20 tjedana, sporadični visoki signali koji okružuju niske signale u T2W sekvenci se smanjuju.
Očita koštana hiperplazija može se vidjeti na mjestu implantacije tijela kralješka u NPE skupini, a koštana hiperplazija javlja se brže od 12 do 20 tjedana (slika 2C) u usporedbi s NPE skupinom, nije uočena značajna promjena u modeliranim tijelima kralježaka; Sham skupina i ME skupina (slika 2C) 2A,B).
(A) Površina tijela kralješka na implantiranom dijelu je vrlo glatka, rupa dobro zacjeljuje i nema hiperplazije u tijelu kralješka. (B) Oblik mjesta implantacije u ME skupini sličan je onome u skupini s lažnom operacijom i nema očite promjene u izgledu mjesta implantacije tijekom vremena. (C) Hiperplazija kosti pojavila se na mjestu implantacije u NPE skupini. Hiperplazija kosti se brzo povećala i čak proširila kroz intervertebralni disk do kontralateralnog tijela kralješka.
Histološka analiza pruža detaljnije informacije o stvaranju kosti. Slika 3 prikazuje fotografije postoperativnih presjeka obojenih H&E-om. U skupini s lažnom operacijom, hondrociti su bili dobro raspoređeni i nije uočena proliferacija stanica (slika 3A). Situacija u ME skupini bila je slična onoj u skupini s lažnom operacijom (slika 3B). Međutim, u NPE skupini, na mjestu implantacije uočen je veliki broj hondrocita i proliferacija stanica sličnih NP (slika 3C);
(A) Trabekule se mogu vidjeti blizu završne ploče, hondrociti su uredno raspoređeni s ujednačenom veličinom i oblikom stanica i bez proliferacije (40 puta). (B) Stanje mjesta implantacije u ME skupini slično je onome u sham skupini. Trabekule i hondrociti se mogu vidjeti, ali nema očite proliferacije na mjestu implantacije (40 puta). (B) Može se vidjeti da hondrociti i stanice slične NP značajno proliferiraju, a oblik i veličina hondrocita su neujednačeni (40 puta).
Ekspresija mRNA interleukina 4 (IL-4), mRNA interleukina 17 (IL-17) i mRNA interferona γ (IFN-γ) uočena je u obje skupine, NPE i ME. Kada su usporedbene razine ekspresije ciljnih gena, ekspresija gena IL-4, IL-17 i IFN-γ bila je značajno povećana u NPE skupini u usporedbi s onima u ME skupini i skupini s lažnom operacijom (slika 4) (P < 0,05). U usporedbi sa skupinom s lažnom operacijom, razine ekspresije IL-4, IL-17 i IFN-γ u ME skupini samo su se neznatno povećale i nisu dosegle statističku promjenu (P > 0,05).
Ekspresija mRNA IL-4, IL-17 i IFN-γ u NPE skupini pokazala je značajno veći trend nego u skupini s lažnom operacijom i ME skupini (P < 0,05).
Nasuprot tome, razine ekspresije u ME skupini nisu pokazale značajnu razliku (P>0,05).
Western blot analiza provedena je korištenjem komercijalno dostupnih antitijela protiv IL-4 i IL-17 kako bi se potvrdio promijenjeni obrazac ekspresije mRNA. Kao što je prikazano na slikama 5A i B, u usporedbi s ME skupinom i skupinom s lažnom operacijom, razine proteina IL-4 i IL-17 u NPE skupini bile su značajno povećane (P < 0,05). U usporedbi sa skupinom s lažnom operacijom, razine proteina IL-4 i IL-17 u ME skupini također nisu dosegle statistički značajne promjene (P > 0,05).
(A) Razine proteina IL-4 i IL-17 u NPE skupini bile su značajno više od onih u ME skupini i placebo skupini (P < 0,05). (B) Western blot histogram.
Zbog ograničenog broja ljudskih uzoraka dobivenih tijekom operacije, jasne i detaljne studije o patogenezi karcinoma mikobakterija (MC) su donekle teške. Pokušali smo uspostaviti životinjski model MC kako bismo proučili njegove potencijalne patološke mehanizme. Istovremeno, korištene su radiološka, histološka i molekularno biološka evaluacija za praćenje tijeka MC induciranog autograftom neurotransmiterapije (NP). Kao rezultat toga, model implantacije NP rezultirao je postupnom promjenom intenziteta signala od 12. do 20. tjedna (mješoviti nizak signal u T1W sekvencama i nizak signal u T2W sekvencama), što ukazuje na promjene u tkivu, a histološke i molekularno biološke evaluacije potvrdile su rezultate radiološke studije.
Rezultati ovog eksperimenta pokazuju da su se na mjestu povrede tijela kralješka u NPE skupini pojavile vizualne i histološke promjene. Istovremeno, uočena je ekspresija gena IL-4, IL-17 i IFN-γ, kao i IL-4, IL-17 i IFN-γ, što ukazuje na to da povreda autolognog tkiva nucleus pulposus u tijelu kralješka može uzrokovati niz signalnih i morfoloških promjena. Lako je uočiti da su signalne karakteristike tijela kralješka životinjskog modela (nizak signal u T1W sekvenci, miješani signal i nizak signal u T2W sekvenci) vrlo slične onima ljudskih stanica kralješka, a MRI karakteristike također potvrđuju opažanja histologije i bruto anatomije, odnosno da su promjene u stanicama tijela kralješka progresivne. Iako se upalni odgovor uzrokovan akutnom traumom može pojaviti ubrzo nakon punkcije, MRI rezultati pokazali su da su se progresivno rastuće promjene signala pojavile 12 tjedana nakon punkcije i trajale do 20 tjedana bez ikakvih znakova oporavka ili poništavanja MRI promjena. Ovi rezultati upućuju na to da je autologna vertebralna NP pouzdana metoda za uspostavljanje progresivne mišićne vene u kunića.
Ovaj model punkcije zahtijeva odgovarajuću vještinu, vrijeme i kirurški napor. U preliminarnim eksperimentima, disekcija ili pretjerana stimulacija paravertebralnih ligamentnih struktura može rezultirati stvaranjem vertebralnih osteofita. Treba paziti da se ne oštete ili iritiraju susjedni diskovi. Budući da se dubina prodiranja mora kontrolirati kako bi se dobili dosljedni i ponovljivi rezultati, ručno smo napravili čep odrezivanjem ovojnice igle duljine 3 mm. Korištenje ovog čepa osigurava ujednačenu dubinu bušenja u tijelu kralješka. U preliminarnim eksperimentima, tri ortopedska kirurga uključena u operaciju otkrila su da je s iglama kalibra 16 lakše raditi nego s iglama kalibra 18 ili drugim metodama. Kako bi se izbjeglo pretjerano krvarenje tijekom bušenja, držanje igle mirno neko vrijeme osigurat će prikladniji otvor za umetanje, što sugerira da se na ovaj način može kontrolirati određeni stupanj MC-a.
Iako su se mnoge studije bavile MC, malo se zna o etiologiji i patogenezi MC25,26,27. Na temelju naših prethodnih studija otkrili smo da autoimunost igra ključnu ulogu u pojavi i razvoju MC12. Ova studija ispitala je kvantitativnu ekspresiju IL-4, IL-17 i IFN-γ, koji su glavni putevi diferencijacije CD4+ stanica nakon stimulacije antigenom. U našoj studiji, u usporedbi s negativnom skupinom, NPE skupina imala je veću ekspresiju IL-4, IL-17 i IFN-γ, a razine proteina IL-4 i IL-17 također su bile više.
Klinički, ekspresija IL-17 mRNA je povećana u NP stanicama pacijenata s hernijom diska28. Povećane razine ekspresije IL-4 i IFN-γ također su pronađene u modelu akutne nekompresivne hernije diska u usporedbi sa zdravim kontrolama29. IL-17 igra ključnu ulogu u upali, ozljedi tkiva kod autoimunih bolesti30 i pojačava imunološki odgovor na IFN-γ31. Pojačano oštećenje tkiva posredovano IL-17 zabilježeno je kod MRL/lpr miševa32 i miševa osjetljivih na autoimunost33. IL-4 može inhibirati ekspresiju proinflamatornih citokina (kao što su IL-1β i TNFα) i aktivaciju makrofaga34. Izviješteno je da je ekspresija mRNA IL-4 bila drugačija u NPE skupini u usporedbi s IL-17 i IFN-γ u istom vremenskom trenutku; ekspresija mRNA IFN-γ u NPE skupini bila je značajno veća nego u drugim skupinama. Stoga, proizvodnja IFN-γ može biti medijator upalnog odgovora izazvanog interkalacijom NP. Studije su pokazale da IFN-γ proizvode više vrsta stanica, uključujući aktivirane pomoćničke T stanice tipa 1, prirodne stanice ubojice i makrofage35,36, te je ključni proinflamatorni citokin koji potiče imunološki odgovor37.
Ova studija sugerira da bi autoimuni odgovor mogao biti uključen u pojavu i razvoj MC. Luoma i sur. otkrili su da su signalne karakteristike MC i prominentnog NP slične na MRI snimci, te da oba pokazuju visoki signal u T2W sekvenci38. Potvrđeno je da su neki citokini usko povezani s pojavom MC, poput IL-139. Ma i sur. sugerirali su da izbočenje NP prema gore ili dolje može imati veliki utjecaj na pojavu i razvoj MC12. Bobechko40 i Herzbein i sur.41 izvijestili su da je NP imunotolerantno tkivo koje ne može ući u vaskularnu cirkulaciju od rođenja. Izbočine NP uvode strana tijela u krvotok, čime posreduju lokalne autoimune reakcije42. Autoimune reakcije mogu izazvati veliki broj imunoloških čimbenika, a kada su ti čimbenici kontinuirano izloženi tkivima, mogu uzrokovati promjene u signalizaciji43. U ovoj studiji, prekomjerna ekspresija IL-4, IL-17 i IFN-γ tipični su imunološki čimbenici, što dodatno dokazuje blisku vezu između NP i MC44. Ovaj životinjski model dobro oponaša proboj NP i ulazak u završnu ploču. Ovaj proces je dodatno otkrio utjecaj autoimunosti na MC.
Kao što se i očekivalo, ovaj životinjski model pruža nam moguću platformu za proučavanje MC-a. Međutim, ovaj model i dalje ima neka ograničenja: prvo, tijekom faze promatranja životinja, neke zečeve u međustadiju potrebno je eutanazirati radi histološkog i molekularno-biološkog testiranja, pa neke životinje s vremenom „izlaze iz upotrebe“. Drugo, iako su u ovoj studiji postavljene tri vremenske točke, nažalost, modelirali smo samo jednu vrstu MC-a (promjena Modic tipa I), tako da to nije dovoljno za prikaz procesa razvoja ljudske bolesti, a potrebno je postaviti više vremenskih točaka kako bi se bolje uočile sve promjene signala. Treće, promjene u strukturi tkiva doista se mogu jasno prikazati histološkim bojenjem, ali neke specijalizirane tehnike mogu bolje otkriti mikrostrukturne promjene u ovom modelu. Na primjer, mikroskopija s polariziranim svjetlom korištena je za analizu stvaranja fibrohrskavice u intervertebralnim diskovima zečeva45. Dugoročni učinci NP na MC i završnu ploču zahtijevaju daljnja istraživanja.
Pedeset četiri mužjaka novozelandskih bijelih kunića (težine oko 2,5-3 kg, dobi 3-3,5 mjeseci) nasumično su podijeljena u skupinu s lažnom operacijom, skupinu s implantacijom mišića (ME skupina) i skupinu s implantacijom korijena živca (NPE skupina). Sve eksperimentalne postupke odobrio je Etički odbor bolnice Tianjin, a eksperimentalne metode provedene su u strogom skladu s odobrenim smjernicama.
Neka poboljšanja su napravljena u kirurškoj tehnici S. Sobajime 46. Svaki je zec postavljen u lateralni ležeći položaj, a prednja površina pet uzastopnih lumbalnih intervertebralnih diskova (IVD) eksponirana je posterolateralnim retroperitonealnim pristupom. Svaki je zec primio opću anesteziju (20% uretan, 5 ml/kg putem ušne vene). Uzdužni rez kože napravljen je od donjeg ruba rebara do ruba zdjelice, 2 cm ventralno od paravertebralnih mišića. Desna anterolateralna kralježnica od L1 do L6 eksponirana je oštrom i tupom disekcijom potkožnog tkiva, retroperitonealnog tkiva i mišića (slika 6A). Razina diska određena je pomoću ruba zdjelice kao anatomske orijentacijske točke za razinu diska L5-L6. Upotrijebite iglu za ubod kalibra 16 za bušenje rupe blizu završne ploče kralješka L5 do dubine od 3 mm (slika 6B). Pomoću štrcaljke od 5 ml aspirirajte autologni nucleus pulposus u intervertebralnom disku L1-L2 (slika 6C). Uklonite nucleus pulposus ili mišić prema zahtjevima svake skupine. Nakon što se bušotina produbi, resorptivni šavovi se postavljaju na duboku fasciju, površinsku fasciju i kožu, pazeći da se tijekom operacije ne ošteti periostalno tkivo tijela kralješka.
(A) Disk L5-L6 se eksponira posterolateralnim retroperitonealnim pristupom. (B) Iglom kalibra 16 izbušite rupu blizu završne ploče L5. (C) Uzimaju se autologni MF-ovi.
Opća anestezija primijenjena je 20%-tnim uretanom (5 ml/kg) putem ušne vene, a rendgenske snimke lumbalne kralježnice ponovljene su 12, 16 i 20 tjedana nakon operacije.
Kunići su žrtvovani intramuskularnom injekcijom ketamina (25,0 mg/kg) i intravenskim natrijevim pentobarbitalom (1,2 g/kg) 12, 16 i 20 tjedana nakon operacije. Cijela kralježnica je uklonjena za histološku analizu i provedena je stvarna analiza. Za otkrivanje promjena imunoloških faktora korišteni su kvantitativna reverzna transkripcija (RT-qPCR) i Western blotting.
MRI pretrage provedene su na kunićima pomoću kliničkog magneta od 3,0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) opremljenog ortogonalnim prijemnikom zavojnice za ud. Kunići su anestezirani s 20%-tnim uretanom (5 mL/kg) putem ušne vene, a zatim su postavljeni na leđa unutar magneta s lumbalnim područjem centriranim na kružnoj površinskoj zavojnici promjera 5 inča (GE Medical Systems). Koronalne T2-ponderirane lokalizacijske slike (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) snimljene su kako bi se definirala lokacija lumbalnog diska od L3-L4 do L5-L6. Sagitalno ravninski T2-ponderirani rezovi snimljeni su sa sljedećim postavkama: brzi spin-echo slijed s vremenom ponavljanja (TR) od 2200 ms i vremenom odjeka (TE) od 70 ms, matrica; vidno polje od 260 i osam podražaja; debljina reza bila je 2 mm, razmak 0,2 mm.
Nakon što je snimljena posljednja fotografija i ubijen posljednji zec, lažni, mišićno ugrađeni i NP diskovi su uklonjeni za histološki pregled. Tkiva su fiksirana u 10% neutralnom puferiranom formalinu tijekom 1 tjedna, dekalcificirana etilendiamintetraoctenom kiselinom i parafinski secirana. Blokovi tkiva su ugrađeni u parafin i izrezani na sagitalne rezove (debljine 5 μm) pomoću mikrotoma. Rezovi su obojeni hematoksilinom i eozinom (H&E).
Nakon prikupljanja intervertebralnih diskova od zečeva u svakoj skupini, ukupna RNA je ekstrahirana pomoću kolone UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kina) prema uputama proizvođača i sustava reverzne transkripcije ImProm II (Promega Inc., Madison, WI, SAD). Izvršena je reverzna transkripcija.
RT-qPCR je proveden korištenjem Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., SAD) i SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAD) prema uputama proizvođača. Volumen PCR reakcije bio je 20 μl i sadržavao je 1,5 μl razrijeđene cDNA i 0,2 μM svakog primera. Primere je dizajnirao OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA), a proizvela ih je tvrtka Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kina) (Tablica 1). Korišteni su sljedeći uvjeti termičkog cikliranja: početni korak aktivacije polimeraze na 94°C tijekom 2 minute, zatim 40 ciklusa od 15 sekundi svaki na 94°C za denaturaciju predloška, žarenje tijekom 1 minute na 60°C, ekstenzija i fluorescencija. Mjerenja su provedena tijekom 1 minute na 72°C. Svi uzorci su amplificirani tri puta, a prosječna vrijednost korištena je za RT-qPCR analizu. Podaci amplifikacije analizirani su pomoću FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, SAD). Ekspresija gena IL-4, IL-17 i IFN-γ normalizirana je na endogenu kontrolu (ACTB). Relativne razine ekspresije ciljne mRNA izračunate su pomoću 2-ΔΔCT metode.
Ukupni proteini ekstrahirani su iz tkiva pomoću homogenizatora tkiva u RIPA puferu za lizu (koji sadrži koktel inhibitora proteaze i fosfataze), a zatim centrifugirani pri 13 000 okretaja u minuti tijekom 20 minuta na 4 °C kako bi se uklonili ostaci tkiva. Pedeset mikrograma proteina naneseno je po traci, odvojeno 10% SDS-PAGE-om, a zatim preneseno na PVDF membranu. Blokiranje je provedeno u 5% obranom mlijeku u prahu u Tris-puferiranoj otopini soli (TBS) koja sadrži 0,1% Tween 20 tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi. Membrana je inkubirana s primarnim zečjim anti-dekorinskim antitijelom (razrijeđeno 1:200; Boster, Wuhan, Kina) (razrijeđeno 1:200; Bioss, Peking, Kina) preko noći na 4 °C i reagirala je drugog dana; sa sekundarnim antitijelom (kozji anti-zečji imunoglobulin G u razrjeđenju 1:40 000) u kombinaciji s peroksidazom hrena (Boster, Wuhan, Kina) tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi. Western blot signali detektirani su povećanom kemiluminiscencijom na kemiluminiscentnoj membrani nakon zračenja X-zrakama. Za denzitometrijsku analizu, blotovi su skenirani i kvantificirani pomoću BandScan softvera, a rezultati su izraženi kao omjer imunoreaktivnosti ciljnog gena i imunoreaktivnosti tubulina.
Statistički izračuni provedeni su korištenjem programskog paketa SPSS16.0 (SPSS, SAD). Podaci prikupljeni tijekom istraživanja izraženi su kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (srednja vrijednost ± SD) i analizirani korištenjem jednosmjerne analize varijance s ponovljenim mjerenjima (ANOVA) kako bi se utvrdile razlike između dvije skupine. Vrijednost P < 0,05 smatrana je statistički značajnom.
Stoga bi uspostavljanje životinjskog modela MC implantacijom autolognih NP u tijelo kralješka i provođenjem makroanatomskog promatranja, MRI analize, histološke evaluacije i molekularno biološke analize moglo postati važan alat za procjenu i razumijevanje mehanizama ljudskog MC i razvoj novih terapijskih intervencija.
Kako citirati ovaj članak: Han, C. i dr. Životinjski model Modicovih promjena uspostavljen je implantacijom autologne nucleus pulposus u subhondralnu kost lumbalne kralježnice. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. i Boos, N. Magnetska rezonancija lumbalne kralježnice: prevalencija hernijacije i retencije diska, kompresija korijena živca, abnormalnosti završne ploče i osteoartritis fasetnog zgloba u asimptomatskih dobrovoljaca. stopa. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS i Leboeuf-Eed, K. Modicovske promjene i njihov odnos s kliničkim nalazima. European Spine Journal: službena publikacija Europskog društva za kralježnicu, Europskog društva za deformacije kralježnice i Europskog društva za istraživanje vratne kralježnice 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M. i dr. Modične promjene u završnim pločama lumbalnih kralježaka: prevalencija i povezanost s boli u donjem dijelu leđa i išijasom kod muških radnika srednje dobi. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. i Dalinka, M. Magnetska rezonancija promjena koštane srži u blizini završne ploče kod degenerativne bolesti lumbalne kralježnice. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ i Carter, JR Degenerativna bolest diska: procjena promjena vertebralne srži magnetskom rezonancom. Radiologija 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS i Carter, JR Slikovni prikaz degenerativne bolesti diska. Radiologija 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS i dr. Prediktori promjena signala neovertebralne završne ploče (Modic) u općoj populaciji. European Spine Journal: Službena publikacija Europskog društva za kralježnicu, Europskog društva za deformacije kralježnice i Europskog društva za istraživanje vratne kralježnice, Odjel 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB i Mannisch, K. Modicove promjene nakon hernije lumbalnog diska. European Spine Journal: Službena publikacija Europskog društva za kralježnicu, Europskog društva za deformacije kralježnice i Europskog društva za istraživanje vratne kralježnice 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. i Kaapa, E. Modicove promjene tipa I mogu predvidjeti brzo progresivnu deformacijsku degeneraciju diska: jednogodišnja prospektivna studija. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ i Fan, SW Modične promjene: mogući uzroci i doprinos degeneraciji lumbalnog diska. Medicinske hipoteze 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Ruptura unutarnjeg diska. Problemi s prolapsom diska tijekom 50 godina. Kralješnica (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Vrijeme objave: 13. prosinca 2024.