Hvala vam što ste posjetili prirodu.com. Verzija preglednika koju koristite ima ograničenu CSS podršku. Za najbolje rezultate, preporučujemo korištenje novog preglednika (ili onemogućavanja načina kompatibilnosti u Internet Exploreru). U međuvremenu, kako bismo osigurali stalnu podršku, prikazat ćemo web mjesto bez stilova i JavaScript.
Uspostavljanje životinjskih modela modičnih promjena (MC) važna je osnova za proučavanje MC. Pedeset i četiri novozelandska bijela zečeva podijeljena su u grupu za lažnu operaciju, grupu implantacije mišića (ME Group) i Nucleus Pulposus Implantacing Group (NPE Group). U NPE skupini, intervertebralni disk bio je izložen anterolateralnim lumbalnim kirurškim pristupom, a igla je korištena za probijanje tijela kralježaka L5 u blizini krajnje ploče. NP je izvađen iz intervertebralnog diska L1/2 špricom i ubrizgava se u nju. Bušenje rupe u subhondralnoj kosti. Kirurški postupci i metode bušenja u skupini za implantaciju mišića i grupe lažne operacije bili su isti kao i oni iz NP implantacijske skupine. U grupi ME, komad mišića stavljen je u rupu, dok je u grupi za lažnu operaciju ništa nije bilo stavljeno u rupu. Nakon operacije provedeno je MRI skeniranje i molekularno biološko ispitivanje. Signal u NPE grupi promijenio se, ali nije bilo očigledne promjene signala u grupi za prijenos i ME grupi. Histološko promatranje pokazalo je da je na mjestu implantacije primijećena nenormalna proliferacija tkiva, a ekspresija IL-4, IL-17 i IFN-γ povećana je u NPE skupini. Implantacija NP u subhondralnu kost može tvoriti životinjski model MC.
Modične promjene (MC) su lezije kralježaka i susjedne koštane srži vidljive na snimanju magnetske rezonancije (MRI). Oni su prilično česti kod osoba s pridruženim simptomima1. Mnoge su studije naglasile važnost MC -a zbog povezanosti s bolovima u donjem dijelu leđa (LBP) 2,3. De Roos i suradnici i Modic i dr .5 neovisno su prvo opisali tri različite vrste subhondralnih nepravilnosti signala u srži kralježaka. Promjene tipa I su hipointenzije na T1-ponderiranim (T1W) sekvenci i hiperintenziji na T2-ponderiranim (T2W) nizovima. Ova lezija otkriva krajnje ploče pukotine i susjedno vaskularno granulacijsko tkivo u koštanoj srži. Promjene modične tipa II pokazuju visoki signal i na T1W i T2W sekvence. U ovoj vrsti lezije može se naći uništavanje na krajnjoj ploči, kao i histološka masna zamjena susjedne koštane srži. Promjene modične tipa III pokazuju nizak signal u sekvencama T1W i T2W. Primijećene su sklerotične lezije koje odgovaraju krajnjim pločama6. MC se smatra patološkom bolešću kralježnice i usko je povezan s mnogim degenerativnim bolestima kralježnice7,8,9.
S obzirom na dostupne podatke, nekoliko je studija pružilo detaljne uvide u etiologiju i patološke mehanizme MC. Albert i sur. sugerirao je da MC može biti uzrokovano hernijom diska8. Hu i sur. pripisuje MC tešnjoj degeneraciji diska10. KROC je predložio koncept "unutarnjeg puknuća diska", u kojem se navodi da trauma ponavljanja diska može dovesti do mikroteara na krajnjoj ploči. Nakon formiranja rascjepa, uništavanje na krajnjoj ploči pomoću jezgre pulposusa (NP) može pokrenuti autoimuni odgovor, što dodatno dovodi do razvoja MC11. Ma i sur. Dijelio je slično stajalište i izvijestio da autoimunitet izazvan NP-om igra ključnu ulogu u patogenezi MC12.
Stanice imunološkog sustava, posebno CD4+ T Helper limfociti, igraju kritičnu ulogu u patogenezi autoimuniteta13. Nedavno otkriveni podskup Th17 proizvodi protuupalni citokin IL-17, potiče ekspresiju hemokina i potiče T stanice u oštećenim organima da proizvode IFN-γ14. Th2 stanice također igraju jedinstvenu ulogu u patogenezi imunoloških odgovora. Ekspresija IL-4 kao reprezentativne Th2 stanice može dovesti do teških imunopatoloških posljedica15.
Iako su provedene mnoge kliničke studije na MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, još uvijek postoji nedostatak odgovarajućih eksperimentalnih modela na životinjama koji mogu oponašati MC proces koji se često javlja kod ljudi i može biti Koristi se za istraživanje etiologije ili novih tretmana poput ciljane terapije. Do danas je prijavljeno da je samo nekoliko životinjskih modela MC -a proučavalo temeljne patološke mehanizme.
Na temelju teorije autoimune koju su predložili Albert i Ma, ova studija uspostavila je jednostavan i ponovljiv model zeca MC autotransplantiranjem NP -a u blizini izbušene krajnje kralježnice. Ostali su ciljevi promatranje histoloških karakteristika životinjskih modela i procjena specifičnih mehanizama NP -a u razvoju MC. U tu svrhu koristimo tehnike poput molekularne biologije, MRI i histoloških studija za proučavanje progresije MC.
Dva kunića umrla su od krvarenja tijekom operacije, a četiri zečeva umrla je tijekom anestezije tijekom MRI. Preostalih 48 zečeva preživjelo je i nije pokazalo ponašanja ili neurološke znakove nakon operacije.
MRI pokazuje da je intenzitet signala ugrađenog tkiva u različite rupe različit. Intenzitet signala tijela kralježaka L5 u NPE grupi postupno se mijenjao u 12, 16 i 20 tjedana nakon umetanja (T1W sekvenca pokazala je nizak signal, a T2W slijed pokazao je miješani signal plus nizak signal) (Sl. 1C), dok su MRI pojavi Od ostale dvije skupine ugrađenih dijelova ostale su relativno stabilne u istom razdoblju (Sl. 1A, B).
(A) Reprezentativni sekvencijalni MRI -ovi zečjeg lumbalne kralježnice u 3 vremenske točke. Nisu pronađene nepravilnosti signala na slikama grupe lažne operacije. (B) Karakteristike signala tijela kralježaka u ME grupi slične su onima u grupi lažne operacije, a na mjestu ugradnje tijekom vremena ne opaža se značajna promjena signala. (C) U NPE skupini, niski signal je jasno vidljiv u T1W slijedu, a miješani signal i niski signal jasno su vidljivi u T2W slijedu. Od razdoblja od 12 tjedana do razdoblja od 20 tjedana, sporadični visoki signali koji okružuju niske signale u sekvenci T2W smanjuju se.
Očigledna hiperplazija kosti može se vidjeti na mjestu implantacije tijela kralježaka u NPE skupini, a kost hiperplazija dolazi brže od 12 do 20 tjedana (Sl. 2C) u usporedbi s NPE skupinom, u modeliranom kralježnici nije opažena značajna promjena tijela; Sham Group i ME Group (Sl. 2C) 2A, b).
(A) Površina tijela kralježaka na implantiranom dijelu je vrlo glatka, rupa se dobro zacijeli, a u tijelu kralježaka nema hiperplazije. (B) Oblik implantiranog mjesta u grupi ME sličan je onom u grupi za lažnu operaciju, a ne postoji očigledna promjena u pojavi implantiranog mjesta tijekom vremena. (C) Kosti hiperplazija dogodila se na implantiranom mjestu u NPE skupini. Kosti hiperplazija brzo se povećavala i čak produžila kroz intervertebralni disk na kontralateralno tijelo kralježaka.
Histološka analiza pruža detaljnije informacije o stvaranju kostiju. Na slici 3 prikazane su fotografije postoperativnih odjeljaka obojenih H&E. U grupi lažne operacije hondrociti su bili dobro raspoređeni i nije otkrivena proliferacija stanica (Sl. 3A). Situacija u grupi ME bila je slična onoj u grupi za lažnu operaciju (Sl. 3B). Međutim, u NPE skupini primijećen je veliki broj hondrocita i proliferacije stanica sličnih NP na mjestu implantacije (Sl. 3C);
(A) Trabekula se mogu vidjeti u blizini krajnje ploče, hondrociti su uredno raspoređeni s ujednačenom veličinom i oblikom stanice i bez proliferacije (40 puta). (B) Stanje mjesta implantacije u grupi ME je slično onome iz grupe Sham. Trabeculae i hondrociti mogu se vidjeti, ali na mjestu implantacije (40 puta) ne postoji očigledno širenje. (B) Može se vidjeti da se hondrociti i stanice slične NP značajno razmnožavaju, a oblik i veličina hondrocita su neujednačeni (40 puta).
Ekspresija mRNA interleukina 4 (IL-4), mRNA interleukina 17 (IL-17) i mRNA interferona γ (IFN-γ) primijećena je i u NPE i ME skupinama. Kada su uspoređene razine ekspresije ciljnih gena, genski izrazi IL-4, IL-17 i IFN-γ značajno su povećani u NPE skupini u usporedbi s onima iz grupe ME i lažnim operativnim skupinama (Sl. 4) (P <0,05). U usporedbi s lažnom operacijskom skupinom, razine ekspresije IL-4, IL-17 i IFN-γ u ME skupini su se neznatno povećale i nisu dostigle statističku promjenu (p> 0,05).
Ekspresija mRNA IL-4, IL-17 i IFN-γ u NPE skupini pokazala je značajno veći trend od onih u grupi za lažnu operaciju i ME grupe (P <0,05).
Suprotno tome, razina ekspresije u ME grupi nije pokazala značajnu razliku (p> 0,05).
Western blot analiza provedena je korištenjem komercijalno dostupnih antitijela protiv IL-4 i IL-17 za potvrđivanje izmijenjenog uzorka ekspresije mRNA. Kao što je prikazano na slikama 5A, B, u usporedbi s ME grupom i lažnom operacijskom skupinom, razine proteina IL-4 i IL-17 u NPE skupini značajno su porasle (p <0,05). U usporedbi s lažnom operacijskom skupinom, razina proteina IL-4 i IL-17 u ME grupi također nije uspjela postići statistički značajne promjene (p> 0,05).
(A) Razine proteina IL-4 i IL-17 u NPE skupini bile su značajno veće od onih u grupi ME i placebo skupine (P <0,05). (B) Western blot histogram.
Zbog ograničenog broja ljudskih uzoraka dobivenih tijekom operacije, jasne i detaljne studije o patogenezi MC -a su pomalo teške. Pokušali smo uspostaviti životinjski model MC -a kako bismo proučili njegove potencijalne patološke mehanizme. Istodobno, radiološka procjena, histološka procjena i molekularna biološka procjena korištena su za praćenje tijeka MC induciranog NP autograftom. Kao rezultat, model implantacije NP rezultirao je postupnom promjenom intenziteta signala s 12 tjedana do 20 tjedana vremenskih točaka (miješani niski signal u T1W sekvencama i niskom signalu u T2W sekvencama), što ukazuje na promjene tkiva, te histološke i molekularne Biološke evaluacije potvrdile su rezultate radiološke studije.
Rezultati ovog eksperimenta pokazuju da su se na mjestu kršenja tijela kralježaka u NPE skupini dogodile vizualne i histološke promjene. U isto vrijeme, primijećena je ekspresija gena IL-4, IL-17 i IFN-γ, kao i IL-4, IL-17 i IFN-γ, što ukazuje na to da je kršenje autolognog tkiva pulposa u jezgri u kralježnici u kralježnici Tijelo može uzrokovati niz signalnih i morfoloških promjena. Lako je utvrditi da su signalne karakteristike kralježnih tijela životinjskog modela (nizak signal u T1W nizu, miješani signal i nizak signal u T2W nizu) vrlo slične onima ljudskih kralježnih stanica, a MRI karakteristike su i MRI Potvrdite opažanja histologije i bruto anatomije, to jest, promjene u stanicama kralježaka su progresivne. Iako se upalni odgovor uzrokovan akutnom traumom može pojaviti ubrzo nakon probijanja, rezultati MRI pokazali su da su se progresivno povećavali promjene signala 12 tjedana nakon probijanja i ustrajali do 20 tjedana bez ikakvih znakova oporavka ili preokreta promjena MRI. Ovi rezultati sugeriraju da je autologni kralježnični NP pouzdana metoda za uspostavljanje progresivnog MV -a kod zečeva.
Ovaj model probijanja zahtijeva odgovarajuću vještinu, vrijeme i kirurški napor. U preliminarnim eksperimentima, disekcija ili prekomjerna stimulacija paravertebralnih ligamentnih struktura može rezultirati stvaranjem kralježnih osteofita. Treba paziti da ne ošteti ili nadražuje susjedne diskove. Budući da se dubina prodiranja mora kontrolirati kako bi se dobili dosljedni i ponovljivi rezultati, ručno smo napravili čep rezanjem omotača igle duge 3 mm. Korištenje ovog čepa osigurava jednoliku dubinu bušenja u tijelu kralježaka. U preliminarnim eksperimentima, tri ortopedska kirurga uključena u operaciju pronašla su igle s 16 mjerača lakšeg za rad od igala od 18 mjera ili drugih metoda. Kako bi se izbjeglo pretjerano krvarenje tijekom bušenja, držanje igle još neko vrijeme pružit će prikladniju rupu za umetanje, sugerirajući da se određeni stupanj MC može kontrolirati na ovaj način.
Iako su mnoge studije ciljale MC, malo se zna o etiologiji i patogenezi MC25,26,27. Na temelju naših prethodnih studija, otkrili smo da autoimunitet igra ključnu ulogu u pojavi i razvoju MC12. Ovo je istraživanje ispitalo kvantitativnu ekspresiju IL-4, IL-17 i IFN-γ, koji su glavni putevi diferencijacije CD4+ stanica nakon stimulacije antigena. U našem istraživanju, u usporedbi s negativnom skupinom, NPE skupina imala je veću ekspresiju IL-4, IL-17 i IFN-γ, a razine proteina IL-4 i IL-17 također su bile veće.
Klinički, ekspresija mRNA IL-17 povećava se u NP stanicama od bolesnika s hernijom diska28. Povećane razine ekspresije IL-4 i IFN-γ također su pronađene u akutnom modelu hernijacije nekompresivnog diska u usporedbi sa zdravim kontrolama29. IL-17 igra ključnu ulogu u upali, ozljede tkiva u autoimunim bolestima30 i pojačava imunološki odgovor na IFN-γ31. Pojačana ozljeda tkiva posredovana IL-17 zabilježena je kod MRL/LPR miševa32 i miševa osjetljivih na autoimunitet. IL-4 može inhibirati ekspresiju proupalnih citokina (poput IL-lp i TNFα) i aktivacije makrofaga34. Objavljeno je da je ekspresija mRNA IL-4 bila različita u NPE skupini u usporedbi s IL-17 i IFN-γ u isto vrijeme; Ekspresija mRNA IFN-γ u NPE skupini bila je značajno veća od one u ostalim skupinama. Stoga, proizvodnja IFN-γ može biti posrednik upalnog odgovora izazvanog NP interkaliranjem. Studije su pokazale da IFN-γ proizvodi više tipova stanica, uključujući aktivirane pomoćne T stanice tipa 1, stanice prirodnih ubojica i makrofage35,36, te je ključni proupalni citokin koji potiče imunološke odgovore37.
Ova studija sugerira da autoimuni odgovor može biti uključen u pojavu i razvoj MC. Luoma i sur. utvrđeno je da su signalne karakteristike MC i istaknutog NP -a slične na MRI, a obje pokazuju visoki signal u T2W slijedu38. Potvrđeno je da su neki citokini usko povezani s pojavom MC-a, poput IL-139. Ma i sur. sugerirao je da izbočenje NP prema gore ili prema dolje može imati veliki utjecaj na pojavu i razvoj MC12. Bobechko40 i Herzbein i ostali.41 izvijestili su da je NP imunotolerantno tkivo koje ne može ući u vaskularnu cirkulaciju od rođenja. NP izbočine unose inozemna tijela u opskrbu krvlju, posredujući lokalnim autoimunim reakcijama42. Autoimune reakcije mogu izazvati veliki broj imunoloških čimbenika, a kada su ti čimbenici kontinuirano izloženi tkivima, one mogu uzrokovati promjene u signalizaciji43. U ovom istraživanju, prekomjerna ekspresija IL-4, IL-17 i IFN-γ tipični su imunološki čimbenici, što dodatno dokazuje bliski odnos između NP i MCS44. Ovaj životinjski model dobro oponaša proboj NP -a i ulazak u krajnju ploču. Ovaj je postupak nadalje otkrio utjecaj autoimunosti na MC.
Kao što se očekivalo, ovaj životinjski model pruža nam moguću platformu za proučavanje MC. Međutim, ovaj model još uvijek ima određena ograničenja: prvo, tijekom faze promatranja životinja, neki zečevi u srednjem stadiju moraju biti eutanazirani za histološka i molekularna biološka ispitivanja, tako da neke životinje s vremenom „padaju iz upotrebe“. Drugo, iako su u ovoj studiji postavljene tri vremenske točke, nažalost, modelirali smo samo jednu vrstu MC -a (modna vrsta I mijenja se), tako da nije dovoljno za predstavljanje procesa razvoja ljudske bolesti, a više vremenskih točaka treba postaviti na Bolje promatrajte sve promjene signala. Treće, promjene u strukturi tkiva doista se mogu jasno pokazati histološkim bojenjem, ali neke specijalizirane tehnike mogu bolje otkriti mikrostrukturne promjene u ovom modelu. Na primjer, polarizirana svjetlosna mikroskopija korištena je za analizu stvaranja fibrokartilage u zečjim intervertebralnim diskovima45. Dugoročni učinci NP-a na MC i krajnju ploču zahtijevaju daljnje proučavanje.
Pedeset i četiri muške novozelandske bijele zečeve (težina oko 2,5-3 kg, dobi od 3-3,5 mjeseci) nasumično su podijeljeni u lažno operativnu skupinu, mišićnu implantacijsku skupinu (ME Group) i grupu implantacije živčanih korijena (NPE grupa). Sve eksperimentalne postupke odobrilo je Etičko povjerenstvo bolnice Tianjin, a eksperimentalne metode provedene su u strogoj u skladu s odobrenim smjernicama.
Neka su poboljšanja u kirurškoj tehnici S. sobajima 46. Svaki je zec postavljen u bočni položaj leženja, a prednja površina pet uzastopnih lumbalnih intervertebralnih diskova (IVD) izložena je korištenjem posterolateralnog retroperitonealnog pristupa. Svaki je zec dobio opću anesteziju (20% uretan, 5 ml/kg preko ušne vene). Uzdužni rez kože napravljen je od donjeg ruba rebara do zdjeličnog ruba, ventralnog 2 cm do paravertebralnih mišića. Desna anterolateralna kralježnica od L1 do L6 bila je izložena oštrim i tupim disekcijom nadređenog potkožnog tkiva, retroperitonealnog tkiva i mišića (Sl. 6A). Razina diska određena je korištenjem zdjeličnog ruba kao anatomske orijentacije za razinu diska L5-L6. Upotrijebite iglu za probijanje od 16 mjera za izbušite rupu u blizini krajnje ploče kralješka L5 do dubine od 3 mm (Sl. 6B). Koristite špricu od 5 ml za aspiraciju autolognog jezgre pulposusa u intervertebralnom disku L1-L2 (Sl. 6C). Uklonite jezgro pulposus ili mišić prema zahtjevima svake skupine. Nakon što se rupa za bušenje produbi, na duboku fasciju, površno fasciju i kožu, stavljaju se upijajući šavovi, pazeći da ne ošteti periostealno tkivo tijela kralježaka tijekom operacije.
(A) Disk L5 -L6 izložen je posterolateralnim retroperitonealnim pristupom. (B) Upotrijebite iglu s 16 mjera za izbušenje rupe u blizini krajnje ploče L5. (C) Autologni MF -ovi se skupljaju.
Opća anestezija primijenjena je s 20% uretanom (5 ml/kg) koji se primjenjuje preko ušne vene, a radiografije lumbalne kralježnice ponovljene su u 12, 16 i 20 tjedana postoperativno.
Zečevi su žrtvovani intramuskularnom injekcijom ketamina (25,0 mg/kg) i intravenskom natrijevom pentobarbitalom (1,2 g/kg) u 12, 16 i 20 tjedana nakon operacije. Čitava kralježnica uklonjena je zbog histološke analize i provedena je stvarna analiza. Za otkrivanje promjena u imunološkim čimbenicima korišteni su kvantitativna reverzna transkripcija (RT-qPCR) i Western blotting.
MRI pregledi provedeni su kod zečeva koristeći 3,0 T klinički magnet (GE Medical Systems, Florence, SC) opremljen ortogonalnim prijemnikom zavojnice udova. Zečevi su anestezirani s 20% uretanom (5 ml/kg) preko ušne vene, a zatim su postavili lepinu unutar magneta s lumbalnom regijom usredotočenom na kružnu površinsku zavojnicu promjera 5 inča (GE Medical Systems). Koronalne slike lokalizacije T2 (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) dobivene su kako bi se definirao mjesto lumbalnog diska od L3-L4 do L5-L6. Sagittalne ravnine T2-ponderirane kriške stečene su sljedećim postavkama: Brzi sekvence Spin-Echo s vremenom ponavljanja (TR) od 2200 ms i vremenom Echo (TE) od 70 ms, matrica; vidno polje od 260 i osam podražaja; Debljina reza bila je 2 mm, jaz je bio 0,2 mm.
Nakon što je snimljena posljednja fotografija i posljednji zec je ubijen, sramota, ugrađena u mišiće, a NP diskovi su uklonjeni na histološki pregled. Tkiva su fiksirana u 10% neutralnom puferiranom formalinu tijekom 1 tjedna, dekalcificirana etilendiaminetraoctenom kiselinom i parafinom. Blokovi tkiva ugrađeni su u parafin i izrezani na sagitalne presjeke (debljine 5 µm) pomoću mikrotoma. Odjeljci su obojeni hematoksilinom i eozinom (H&E).
Nakon prikupljanja intervertebralnih diskova od zečeva u svakoj skupini, ukupna RNA izvučena je korištenjem stupca Uniq-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kina), prema uputama proizvođača i improviziranom sustavu za reverznu transkripciju (Promega Inc. , Madison, WI, SAD). Izvršena je reverzna transkripcija.
RT-qPCR je izveden pomoću Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., USA) i SYBR Green Jump Start Taq Retymix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAD) prema uputama proizvođača. Volumen reakcije PCR bio je 20 μL i sadržavao je 1,5 μl razrijeđene cDNA i 0,2 µM svakog temeljnog premaza. Primeri su dizajnirali Oligoperfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA), a proizveden od strane Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kina) (Tablica 1). Korišteni su sljedeći uvjeti toplinskog ciklusa: početni korak aktivacije polimeraze na 94 ° C tijekom 2 minute, a zatim 40 ciklusa od 15 s svaki na 94 ° C za denaturaciju u obliku predloška, žarenje u trajanju od 6 min na 60 ° C, produžetak i fluorescenciju. Mjerenja su provedena 1 min na 72 ° C. Svi su uzorci pojačani tri puta, a prosječna vrijednost korištena je za RT-qPCR analizu. Podaci o pojačanju analizirani su pomoću FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA). Ekspresija gena IL-4, IL-17 i IFN-γ normalizirana je na endogenu kontrolu (ACTB). Relativne razine ekspresije ciljane mRNA izračunati su korištenjem metode 2-ΔΔCT.
Ukupni protein je ekstrahiran iz tkiva pomoću homogenizatora tkiva u puferu RIPA lize (koji sadrži koktel inhibitora proteaze i fosfataze), a zatim centrifugiran na 13 000 okr / min tijekom 20 minuta na 4 ° C kako bi se uklonili tkivni debris. Pedeset mikrograma proteina učitano je po traci, odvojeno s 10% SDS-PAGE, a zatim prebačeno u PVDF membranu. Blokiranje je izvedeno u 5% nefat suhom mlijeku u fiziološkoj otopini puferiranoj Tris (TBS) koja je sa sobom na sobnoj temperaturi koja je sadrže 0,1% Tween 20 tijekom 1 sata. Membrana je inkubirana s zečjim anti-dekorinskim primarnim antitijelom (razrijeđena 1: 200; Boster, Wuhan, Kina) (razrijeđena 1: 200; Bioss, Peking, Kina) preko noći na 4 ° C i reagirala na druge dane; Sa sekundarnim antitijelom (kozji anti-zečji imunoglobulin G pri 1: 40.000 razrjeđivanja) u kombinaciji s peroksidazom hrena (Boster, Wuhan, Kina) 1 sat na sobnoj temperaturi. Western blot signali otkriveni su povećanom kemiluminiscencijom na hemiluminescentnoj membrani nakon zračenja rendgenom. Za denzitometrijsku analizu, mrlje su skenirane i kvantificirane pomoću softvera BandScan, a rezultati su izraženi kao omjer imunoreaktivnosti ciljanog gena i imunoreaktivnosti tubulina.
Statistički proračuni provedeni su korištenjem softverskog paketa SPSS16.0 (SPSS, USA). Podaci prikupljeni tijekom ispitivanja izraženi su kao srednja ± standardna devijacija (srednja ± SD) i analizirani pomoću jednosmjerne analize varijance ponovljenih mjera (ANOVA) za utvrđivanje razlika između dvije skupine. P <0,05 smatrano je statistički značajnim.
Dakle, uspostavljanje životinjskog modela MC -a implantiranjem autolognih NP -ova u tijelo kralježaka i izvođenjem makroanatomskog promatranja, MRI analize, histološke procjene i molekularne biološke analize mogu postati važno sredstvo za procjenu i razumijevanje mehanizama ljudskog MC -a i razvijanje novog terapeuta intervencije.
Kako navesti ovaj članak: Han, C. i sur. Životinjski model modičnih promjena utvrđen je implantiranjem autolognog jezgre pulposusa u subhondralnu kost lumbalne kralježnice. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., i Boos, N. Magnetska rezonanca snimanje lumbalne kralježnice: prevalenca hernije i zadržavanja diska, kompresija korijena živaca, abnormalnosti krajnje ploče i facet zglobova osteoartritisa u asimptomatskim volonterima . stopa. Radiologija 209, 661–666, doi: 10.1148/radiologija.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS i Leboeuf-ied, K. Modične promjene i njihov odnos prema kliničkim nalazima. Europski časopis kralježnice: Službena publikacija Europskog društva kralježnice, Europskog društva za deformitet kralježnice i Europsko društvo za istraživanje kralježnice maternice 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M. i sur. Modične promjene u lumbalnim kralješkama: Prevalencija i povezanost s bolovima u donjem dijelu leđa i išijas kod muških radnika srednjih godina. Kralježnica 32, 1116–1122, doi: 10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. i Dalinka, M. MRI iz koštane srži se mijenja u blizini krajnje ploče u degenerativnoj bolesti lumbalne kralježnice. Ajr. Američki časopis za radiologiju 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ i Carter, JR Degenerativna bolest diska: Procjena promjena kralježaka s MRI. Radiologija 166, 193–199, doi: 10.1148/radiologija.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS i Carter, JR snimanje degenerativne diskovne bolesti. Radiologija 168, 177–186, doi: 10.1148/radiologija.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS i sur. Prediktori neovertebralne krajnje ploče (modus) signala u općoj populaciji. Europski časopis kralježnice: Službena publikacija Europskog društva kralježnice, Europskog društva za deformitet kralježnice i Europsko društvo za istraživanje kralježnice maternice, Odjel 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB i Mannisch, K. Modic se mijenja nakon hernije lumbalnog diska. Europski časopis kralježnice: Službena objava Europskog društva kralježnice, Europskog društva za deformitet kralježnice i Europsko društvo za istraživanje kralježnice maternice 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. i Kaapa, E. Promjene modičnog tipa I mogu predvidjeti brzo progresivnu deformacijsku degeneraciju diska: jednogodišnju prospektivnu studiju. Europski časopis Spine 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
HU, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ i ventilator, SW modične promjene: Mogući uzroci i doprinos degeneraciji lumbalnog diska. Medicinske hipoteze 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV unutarnji disk. Problemi s prolapsom diska tijekom 50 godina. Kralježnica (Phila PA 1976) 11, 650–653 (1986).
Post Vrijeme: prosinac 13-2024