Hvala što ste posjetili Nature.com. Verzija preglednika koju koristite ima ograničenu podršku za CSS. Za najbolje rezultate preporučujemo korištenje novijeg preglednika (ili isključivanje načina rada kompatibilnosti u Internet Exploreru). U međuvremenu, kako bismo osigurali kontinuiranu podršku, prikazat ćemo stranicu bez stilova i JavaScripta.
Uspostavljanje životinjskih modela modičkih promjena (MC) važna je osnova za proučavanje MC. Pedeset i četiri novozelandska bijela kunića podijeljena su u skupinu za lažnu operaciju, skupinu s implantacijom mišića (skupina ME) i skupinu s implantacijom nucleus pulposusa (skupina NPE). U skupini NPE, intervertebralni disk je bio izložen anterolateralnim lumbalnim kirurškim pristupom, a igla je korištena za punkciju L5 tijela kralješka u blizini završne ploče. NP je ekstrahiran iz L1/2 intervertebralnog diska štrcaljkom i ubrizgan u njega. Bušenje rupe u subhondralnoj kosti. Kirurški postupci i metode bušenja u skupini s implantacijom mišića i skupini s lažnom operacijom bili su isti kao i oni u skupini s implantacijom NP. U skupini ME u rupu je stavljen komadić mišića, dok u skupini s lažnom operacijom ništa nije stavljeno u rupu. Nakon operacije učinjena je magnetska rezonanca i molekularno biološka pretraga. Signal u skupini NPE se promijenio, ali nije bilo očite promjene signala u skupini lažne operacije i ME skupini. Histološko promatranje pokazalo je da je uočena abnormalna proliferacija tkiva na mjestu implantacije, a ekspresija IL-4, IL-17 i IFN-γ bila je povećana u NPE skupini. Implantacija NP u subhondralnu kost može stvoriti životinjski model MC.
Modične promjene (MC) lezije su krajnjih ploča kralježaka i susjedne koštane srži vidljive na magnetskoj rezonanciji (MRI). Prilično su česti kod osoba s pridruženim simptomima1. Mnoga su istraživanja naglasila važnost MC-a zbog njegove povezanosti s boli u donjem dijelu leđa (LBP)2,3. de Roos et al.4 i Modic et al.5 nezavisno su prvi opisali tri različita tipa abnormalnosti subhondralnog signala u vertebralnoj koštanoj srži. Modične promjene tipa I su hipointenzivne na T1-ponderiranim (T1W) sekvencama i hiperintenzivne na T2-ponderiranim (T2W) sekvencama. Ova lezija otkriva krajnje ploče fisure i susjedno vaskularno granulacijsko tkivo u koštanoj srži. Modične promjene tipa II pokazuju visok signal i na T1W i na T2W sekvencama. U ovoj vrsti lezije može se naći destrukcija završne ploče, kao i histološka masna zamjena susjedne koštane srži. Modične promjene tipa III pokazuju nizak signal u T1W i T2W sekvencama. Uočene su sklerotične lezije koje odgovaraju završnim pločama6. MC se smatra patološkom bolešću kralježnice i usko je povezan s mnogim degenerativnim bolestima kralježnice7,8,9.
Uzimajući u obzir dostupne podatke, nekoliko studija pružilo je detaljan uvid u etiologiju i patološke mehanizme MC. Albert i sur. sugerirao da bi MC mogla biti uzrokovana diskus hernijom8. Hu i sur. pripisuje MC ozbiljnoj degeneraciji diska10. Kroc je predložio koncept "unutarnje rupture diska", koji kaže da ponavljana trauma diska može dovesti do mikropukotina na završnoj ploči. Nakon formiranja rascjepa, destrukcija završne ploče od strane nucleus pulposusa (NP) može izazvati autoimuni odgovor, što dalje dovodi do razvoja MC11. Ma et al. dijelili su slično mišljenje i izvijestili da autoimunost izazvana NP-om igra ključnu ulogu u patogenezi MC12.
Stanice imunološkog sustava, posebno CD4+ T pomoćni limfociti, igraju ključnu ulogu u patogenezi autoimunosti13. Nedavno otkrivena podskupina Th17 proizvodi proupalni citokin IL-17, potiče ekspresiju kemokina i stimulira T stanice u oštećenim organima da proizvode IFN-γ14. Th2 stanice također igraju jedinstvenu ulogu u patogenezi imunološkog odgovora. Ekspresija IL-4 kao reprezentativne Th2 stanice može dovesti do teških imunopatoloških posljedica15.
Iako su mnoge kliničke studije provedene na MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, još uvijek nedostaju prikladni eksperimentalni modeli na životinjama koji bi mogli oponašati proces MC koji se često javlja kod ljudi i koji se može koristi se za istraživanje etiologije ili novih tretmana kao što je ciljana terapija. Do danas je zabilježeno samo nekoliko životinjskih modela MC-a koji proučavaju temeljne patološke mehanizme.
Na temelju autoimune teorije koju su predložili Albert i Ma, ova je studija uspostavila jednostavan i reproducibilan model MC kunića autotransplantacijom NP u blizini izbušene krajnje ploče kralješka. Ostali ciljevi su promatranje histoloških karakteristika životinjskih modela i procjena specifičnih mehanizama NP u razvoju MC. U tu svrhu koristimo tehnike kao što su molekularna biologija, MRI i histološke studije za proučavanje napredovanja MC-a.
Dva zeca su umrla od krvarenja tijekom operacije, a četiri zeca su umrla tijekom anestezije tijekom magnetske rezonance. Preostalih 48 zečeva je preživjelo i nisu pokazivali znakove ponašanja ili neurološke znakove nakon operacije.
MRI pokazuje da je intenzitet signala ugrađenog tkiva u različitim rupama različit. Intenzitet signala tijela kralješka L5 u skupini NPE postupno se mijenjao 12, 16 i 20 tjedana nakon umetanja (sekvenca T1W pokazala je nizak signal, a sekvenca T2W pokazala je mješoviti signal plus nizak signal) (Slika 1C), dok su MRI izgledi druge dvije skupine ugrađenih dijelova ostao je relativno stabilan tijekom istog razdoblja (sl. 1A, B).
(A) Reprezentativni sekvencijalni MRI lumbalne kralježnice kunića u 3 vremenske točke. Nisu pronađene abnormalnosti signala na slikama skupine lažnih operacija. (B) Karakteristike signala tijela kralješka u skupini ME slične su onima u skupini lažne operacije, a na mjestu ugradnje tijekom vremena nije primijećena značajna promjena signala. (C) U NPE skupini, niski signal je jasno vidljiv u T1W sekvenci, a miješani signal i niski signal jasno su vidljivi u T2W sekvenci. Od razdoblja od 12 tjedana do razdoblja od 20 tjedana, sporadični visoki signali koji okružuju niske signale u T2W sekvenci se smanjuju.
Očita koštana hiperplazija može se vidjeti na mjestu implantacije tijela kralješka u NPE skupini, a koštana hiperplazija se javlja brže od 12 do 20 tjedana (slika 2C) u usporedbi s NPE skupinom, nije primijećena značajna promjena u modeliranoj vertebralnoj skupini. tijela; Lažna skupina i ME skupina (slika 2C) 2A,B).
(A) Površina tijela kralješka na implantiranom dijelu je vrlo glatka, rupa dobro zacjeljuje i nema hiperplazije u tijelu kralješka. (B) Oblik implantiranog mjesta u grupi ME sličan je onom u skupini lažne operacije i nema očite promjene u izgledu implantiranog mjesta tijekom vremena. (C) Došlo je do hiperplazije kostiju na mjestu implantacije u NPE skupini. Hiperplazija kosti se brzo povećala i čak proširila kroz intervertebralni disk do kontralateralnog tijela kralješka.
Histološka analiza daje detaljnije informacije o formiranju kosti. Slika 3 prikazuje fotografije postoperativnih presjeka obojenih H&E. U skupini s lažnom operacijom, kondrociti su bili dobro raspoređeni i nije otkrivena proliferacija stanica (slika 3A). Situacija u skupini ME bila je slična onoj u skupini lažne operacije (slika 3B). Međutim, u NPE skupini, velik broj hondrocita i proliferacija NP-sličnih stanica primijećeni su na mjestu implantacije (slika 3C);
(A) Trabekule se mogu vidjeti blizu krajnje ploče, kondrociti su uredno raspoređeni s ujednačenom veličinom i oblikom stanica i bez proliferacije (40 puta). (B) Stanje mjesta implantacije u skupini ME slično je onom u lažnoj skupini. Mogu se vidjeti trabekule i hondrociti, ali nema očite proliferacije na mjestu implantacije (40 puta). (B) Vidljivo je da se kondrociti i NP-like stanice značajno razmnožavaju, a oblik i veličina kondrocita su neujednačeni (40 puta).
Ekspresija mRNA interleukina 4 (IL-4), mRNA interleukina 17 (IL-17) i mRNA interferona γ (IFN-γ) primijećena je i u NPE i u ME skupinama. Kada su uspoređivane razine ekspresije ciljnih gena, genske ekspresije IL-4, IL-17 i IFN-γ značajno su povećane u NPE skupini u usporedbi s onima u ME skupini i skupini lažne operacije (slika 4). (P <0,05). U usporedbi sa skupinom na lažnoj operaciji, razine ekspresije IL-4, IL-17 i IFN-γ u skupini ME porasle su tek neznatno i nisu dosegle statističku promjenu (P > 0,05).
Ekspresija mRNA IL-4, IL-17 i IFN-γ u NPE skupini pokazala je značajno veći trend nego u skupini s lažnom operacijom i ME skupini (P < 0,05).
Nasuprot tome, razine ekspresije u ME skupini nisu pokazale značajnu razliku (P>0,05).
Western blot analiza provedena je korištenjem komercijalno dostupnih protutijela protiv IL-4 i IL-17 kako bi se potvrdio izmijenjeni obrazac ekspresije mRNA. Kao što je prikazano na slikama 5A,B, u usporedbi s ME grupom i skupinom s lažnom operacijom, razine proteina IL-4 i IL-17 u NPE skupini značajno su povećane (P <0,05). U usporedbi sa skupinom lažne operacije, razine proteina IL-4 i IL-17 u ME skupini također nisu uspjele postići statistički značajne promjene (P>0,05).
(A) Razine proteina IL-4 i IL-17 u NPE skupini bile su značajno više od onih u ME skupini i placebo skupini (P <0,05). (B) Western blot histogram.
Zbog ograničenog broja ljudskih uzoraka dobivenih tijekom operacije, jasne i detaljne studije o patogenezi MC-a donekle su teške. Pokušali smo uspostaviti životinjski model MC-a kako bismo proučili njegove potencijalne patološke mehanizme. U isto vrijeme, radiološka procjena, histološka procjena i molekularna biološka procjena korištene su za praćenje tijeka MC izazvanog NP autotransplantatom. Kao rezultat toga, model implantacije NP rezultirao je postupnom promjenom intenziteta signala od 12-tjednih do 20-tjednih vremenskih točaka (mješoviti niski signal u T1W sekvencama i nizak signal u T2W sekvencama), što ukazuje na promjene tkiva, te histološke i molekularne biološke procjene potvrdile su rezultate radiološke studije.
Rezultati ovog eksperimenta pokazuju da su se vizualne i histološke promjene dogodile na mjestu povrede tijela kralješka u NPE skupini. Istodobno je uočena ekspresija gena IL-4, IL-17 i IFN-γ, kao i IL-4, IL-17 i IFN-γ, što ukazuje da je oštećenje autolognog tkiva nucleus pulposus u vertebralnom tijelo može izazvati niz signalnih i morfoloških promjena. Lako je otkriti da su karakteristike signala tijela kralješaka životinjskog modela (nizak signal u sekvenci T1W, mješoviti signal i nizak signal u sekvenci T2W) vrlo slične onima ljudskih vertebralnih stanica, a karakteristike MRI također potvrđuju zapažanja histologije i grube anatomije, odnosno promjene u stanicama tijela kralješka su progresivne. Iako se upalni odgovor uzrokovan akutnom traumom može pojaviti ubrzo nakon punkcije, rezultati magnetske rezonance pokazali su da su se progresivno rastuće promjene signala pojavile 12 tjedana nakon punkcije i trajale do 20 tjedana bez ikakvih znakova oporavka ili poništavanja MRI promjena. Ovi rezultati sugeriraju da je autologna vertebralna NP pouzdana metoda za utvrđivanje progresivne MV u kunića.
Ovaj model punkcije zahtijeva odgovarajuću vještinu, vrijeme i kirurški napor. U preliminarnim eksperimentima, disekcija ili pretjerana stimulacija paravertebralnih ligamentnih struktura može rezultirati stvaranjem vertebralnih osteofita. Treba paziti da se ne oštete ili iritiraju susjedni diskovi. Budući da se dubina prodiranja mora kontrolirati kako bi se dobili dosljedni i ponovljivi rezultati, ručno smo napravili čep odsijecanjem omotača igle duge 3 mm. Korištenje ovog čepa osigurava jednoliku dubinu bušenja u tijelu kralješka. U preliminarnim eksperimentima, tri ortopedska kirurga uključena u operaciju otkrila su da je lakše raditi s iglama veličine 16 nego s iglama veličine 18 ili drugim metodama. Kako bi se izbjeglo prekomjerno krvarenje tijekom bušenja, držanje igle neko vrijeme mirno omogućit će prikladniju rupu za umetanje, što sugerira da se određeni stupanj MC-a može kontrolirati na ovaj način.
Iako su mnoge studije usmjerene na MC, malo se zna o etiologiji i patogenezi MC25,26,27. Na temelju naših prethodnih studija otkrili smo da autoimunost igra ključnu ulogu u pojavi i razvoju MC12. Ova studija ispitivala je kvantitativnu ekspresiju IL-4, IL-17 i IFN-γ, koji su glavni putevi diferencijacije CD4+ stanica nakon stimulacije antigenom. U našoj studiji, u usporedbi s negativnom skupinom, NPE skupina imala je veću ekspresiju IL-4, IL-17 i IFN-γ, a razine proteina IL-4 i IL-17 također su bile više.
Klinički, ekspresija IL-17 mRNA je povećana u NP stanicama pacijenata s diskus hernijom28. Povećane razine ekspresije IL-4 i IFN-γ također su nađene u modelu akutne nekompresivne diskus hernije u usporedbi sa zdravim kontrolama29. IL-17 igra ključnu ulogu u upalama, ozljedama tkiva kod autoimunih bolesti30 i pojačava imunološki odgovor na IFN-γ31. Pojačana ozljeda tkiva posredovana IL-17 prijavljena je kod MRL/lpr miševa32 i miševa osjetljivih na autoimunost33. IL-4 može inhibirati ekspresiju proupalnih citokina (kao što su IL-1β i TNFα) i aktivaciju makrofaga34. Zabilježeno je da je ekspresija mRNA IL-4 bila različita u NPE skupini u usporedbi s IL-17 i IFN-γ u istoj vremenskoj točki; Ekspresija mRNA IFN-γ u NPE skupini bila je značajno viša od one u drugim skupinama. Stoga proizvodnja IFN-γ može biti posrednik upalnog odgovora izazvanog interkalacijom NP. Studije su pokazale da IFN-γ proizvodi više vrsta stanica, uključujući aktivirane pomoćne T-stanice tipa 1, prirodne stanice ubojice i makrofage35,36, te je ključni proupalni citokin koji potiče imunološki odgovor37.
Ova studija sugerira da autoimuni odgovor može biti uključen u pojavu i razvoj MC-a. Luoma i sur. otkrili da su karakteristike signala MC i istaknutog NP slične na MRI, a oba pokazuju visok signal u T2W sekvenci38. Potvrđeno je da su neki citokini usko povezani s pojavom MC-a, poput IL-139. Ma et al. sugerirali su da izbočenje NP-a prema gore ili dolje može imati veliki utjecaj na pojavu i razvoj MC12. Bobechko40 i Herzbein et al.41 objavili su da je NP imunotolerantno tkivo koje ne može ući u vaskularnu cirkulaciju od rođenja. NP izbočine uvode strana tijela u krvotok, posredujući tako u lokalnim autoimunim reakcijama42. Autoimune reakcije mogu inducirati velik broj imunoloških čimbenika, a kada su ti čimbenici kontinuirano izloženi tkivima, mogu izazvati promjene u signalizaciji43. U ovoj studiji, prekomjerna ekspresija IL-4, IL-17 i IFN-γ tipični su imunološki čimbenici, dodatno dokazujući blisku vezu između NP i MCs44. Ovaj životinjski model dobro oponaša proboj NP i ulazak u završnu ploču. Ovaj proces dodatno je otkrio utjecaj autoimunosti na MC.
Kao što se i očekivalo, ovaj životinjski model pruža nam moguću platformu za proučavanje MC-a. Međutim, ovaj model još uvijek ima neka ograničenja: prvo, tijekom faze promatranja životinja, neke kuniće u srednjem stadiju treba eutanazirati radi histološkog i molekularnobiološkog testiranja, tako da neke životinje s vremenom "ispadaju iz upotrebe". Drugo, iako su u ovoj studiji postavljene tri vremenske točke, nažalost, modelirali smo samo jedan tip MC-a (Modic tip I promjena), tako da to nije dovoljno za predstavljanje procesa razvoja bolesti kod ljudi, i potrebno je postaviti više vremenskih točaka za bolje promatrajte sve promjene signala. Treće, promjene u strukturi tkiva doista se mogu jasno prikazati histološkim bojanjem, ali neke specijalizirane tehnike mogu bolje otkriti mikrostrukturne promjene u ovom modelu. Na primjer, polarizirana svjetlosna mikroskopija korištena je za analizu formiranja fibrohrskavice u intervertebralnim diskovima kunića45. Dugoročni učinci NP na MC i završnu ploču zahtijevaju daljnje proučavanje.
Pedeset i četiri muška novozelandska bijela kunića (težine oko 2,5-3 kg, starosti 3-3,5 mjeseci) nasumično su podijeljena u skupinu za lažnu operaciju, skupinu s implantacijom mišića (skupina ME) i skupinu s implantacijom korijena živca (skupina NPE). Sve eksperimentalne postupke odobrilo je Etičko povjerenstvo bolnice Tianjin, a eksperimentalne metode provedene su u strogom skladu s odobrenim smjernicama.
Neka poboljšanja su napravljena u kirurškoj tehnici S. Sobajima 46 . Svaki kunić postavljen je u bočni ležeći položaj, a prednja površina pet uzastopnih lumbalnih intervertebralnih diskova (IVD) izložena je posterolateralnim retroperitonealnim pristupom. Svaki je kunić dobio opću anesteziju (20% uretan, 5 ml/kg kroz ušnu venu). Napravljen je uzdužni rez kože od donjeg ruba rebara do ruba zdjelice, 2 cm ventralno od paravertebralnih mišića. Desna anterolateralna kralježnica od L1 do L6 bila je izložena oštrom i tupom disekcijom potkožnog tkiva, retroperitonealnog tkiva i mišića (slika 6A). Razina diska određena je korištenjem ruba zdjelice kao anatomske oznake za razinu diska L5-L6. Upotrijebite iglu za ubod kalibra 16 da izbušite rupu u blizini završne ploče kralješka L5 do dubine od 3 mm (slika 6B). Upotrijebite štrcaljku od 5 ml da aspirirate autologni nucleus pulposus u intervertebralnom disku L1-L2 (slika 6C). Uklonite nucleus pulposus ili mišić prema zahtjevima svake skupine. Nakon što se bušilica produbi, na duboku fasciju, površinsku fasciju i kožu postavljaju se resorptivni šavovi, pazeći da se tijekom operacije ne ošteti periostalno tkivo tijela kralješka.
(A) Disk L5–L6 izložen je posterolateralnim retroperitonealnim pristupom. (B) Koristite iglu kalibra 16 da izbušite rupu u blizini završne ploče L5. (C) Sakupljaju se autologne MF.
Opća anestezija primijenjena je s 20% uretanom (5 ml/kg) primijenjenim kroz ušnu venu, a radiografije lumbalne kralježnice ponovljene su 12, 16 i 20 tjedana nakon operacije.
Kunići su žrtvovani intramuskularnom injekcijom ketamina (25,0 mg/kg) i intravenskim natrijevim pentobarbitalom (1,2 g/kg) 12, 16 i 20 tjedana nakon operacije. Cijela kralježnica je uklonjena radi histološke analize i napravljena je prava analiza. Kvantitativna reverzna transkripcija (RT-qPCR) i Western blotting korišteni su za otkrivanje promjena u imunološkim čimbenicima.
Pregledi magnetskom rezonancom izvedeni su na zečevima korištenjem kliničkog magneta od 3,0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) opremljenog ortogonalnim prijemnikom za udove. Kunići su anestezirani s 20% uretanom (5 mL/kg) preko ušne vene i zatim stavljeni na leđa unutar magneta s lumbalnom regijom usredotočenom na zavojnicu s kružnom površinom promjera 5 inča (GE Medical Systems). Koronalne T2-ponderirane lokalizacijske slike (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) dobivene su kako bi se definirala lokacija lumbalnog diska od L3–L4 do L5–L6. T2 ponderirani presjeci u sagitalnoj ravnini dobiveni su sa sljedećim postavkama: brzi spin-eho slijed s vremenom ponavljanja (TR) od 2200 ms i vremenom odjeka (TE) od 70 ms, matrica; vidno polje od 260 i osam podražaja; Debljina rezanja bila je 2 mm, razmak 0,2 mm.
Nakon što je snimljena posljednja fotografija i zadnji zec ubijen, lažni diskovi, diskovi s ugrađenim mišićima i NP diskovi uklonjeni su radi histološkog pregleda. Tkiva su fiksirana u 10% neutralnom puferiranom formalinu 1 tjedan, dekalcificirana etilendiamintetraoctenom kiselinom i parafinski presječena. Blokovi tkiva su ugrađeni u parafin i izrezani na sagitalne presjeke (debljine 5 μm) pomoću mikrotoma. Sekcije su obojene hematoksilinom i eozinom (H&E).
Nakon prikupljanja intervertebralnih diskova od kunića u svakoj skupini, ekstrahirana je ukupna RNA pomoću kolone UNIQ-10 (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Kina) u skladu s uputama proizvođača i ImProm II sustavom reverzne transkripcije (Promega Inc. , Madison, WI, SAD). Provedena je obrnuta transkripcija.
RT-qPCR je proveden korištenjem Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., SAD) i SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, SAD) prema uputama proizvođača. Volumen PCR reakcije bio je 20 μl i sadržavao je 1,5 μl razrijeđene cDNA i 0,2 μM svakog primera. Primere je dizajnirao OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA), a proizveo Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Kina) (Tablica 1). Korišteni su sljedeći uvjeti toplinskog ciklusa: početni korak aktivacije polimeraze na 94°C tijekom 2 minute, zatim 40 ciklusa od po 15 sekundi na 94°C za denaturaciju šablona, žarenje 1 minutu na 60°C, ekstenzija i fluorescencija. mjerenja su obavljena 1 min na 72°C. Svi su uzorci umnoženi tri puta, a prosječna vrijednost korištena je za RT-qPCR analizu. Podaci o pojačanju analizirani su pomoću FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, SAD). Ekspresija gena IL-4, IL-17 i IFN-γ normalizirana je na endogenu kontrolu (ACTB). Relativne razine ekspresije ciljne mRNA izračunate su pomoću 2-ΔΔCT metode.
Ukupni protein ekstrahiran je iz tkiva korištenjem homogenizatora tkiva u puferu za lizu RIPA (koji sadrži koktel inhibitora proteaze i fosfataze) i zatim centrifugiran na 13 000 okretaja u minuti 20 minuta na 4°C kako bi se uklonili ostaci tkiva. Pedeset mikrograma proteina je napunjeno po stazi, odvojeno s 10% SDS-PAGE, i zatim prebačeno na PVDF membranu. Blokiranje je provedeno u 5% nemasnom suhom mlijeku u tris-puferiranoj slanoj otopini (TBS) koja sadrži 0,1% Tween 20 tijekom 1 sata na sobnoj temperaturi. Membrana je inkubirana sa zečjim anti-dekorin primarnim antitijelima (razrijeđeno 1:200; Boster, Wuhan, Kina) (razrijeđeno 1:200; Bioss, Peking, Kina) preko noći na 4°C i reagirala je drugog dana; sa sekundarnim antitijelima (kozji anti-zečji imunoglobulin G u razrjeđenju 1:40 000) u kombinaciji s peroksidazom hrena (Boster, Wuhan, Kina) 1 sat na sobnoj temperaturi. Western blot signali detektirani su povećanom kemiluminiscencijom na kemiluminiscentnoj membrani nakon zračenja X-zrakama. Za denzitometrijsku analizu, mrlje su skenirane i kvantificirane pomoću softvera BandScan, a rezultati su izraženi kao omjer imunoreaktivnosti ciljnog gena prema imunoreaktivnosti tubulina.
Statistički izračuni provedeni su pomoću programskog paketa SPSS16.0 (SPSS, SAD). Podaci prikupljeni tijekom studije izraženi su kao srednja vrijednost ± standardna devijacija (srednja vrijednost ± SD) i analizirani pomoću jednosmjerne analize varijance ponovljenih mjerenja (ANOVA) kako bi se odredile razlike između dvije skupine. P < 0,05 smatra se statistički značajnim.
Stoga, uspostavljanje životinjskog modela MC-a implantacijom autolognih NP-ova u tijelo kralješka i izvođenjem makroanatomskog promatranja, MRI analize, histološke evaluacije i molekularne biološke analize može postati važan alat za procjenu i razumijevanje mehanizama ljudskog MC-a i razvoj novih terapeutskih intervencije.
Kako citirati ovaj članak: Han, C. et al. Životinjski model Modicovih promjena uspostavljen je implantacijom autolognog nucleus pulposusa u subhondralnu kost lumbalne kralježnice. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. i Boos, N. Magnetska rezonancija lumbalne kralježnice: prevalencija diskus hernije i retencije, kompresija korijena živaca, abnormalnosti završne ploče i osteoartritis fasetnog zgloba u asimptomatskih dobrovoljaca . stopa. Radiologija 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, i Leboeuf-Eed, K. Modic promjene i njihov odnos s kliničkim nalazima. European Spine Journal: službena publikacija Europskog društva za kralježnicu, Europskog društva za deformacije kralježnice i Europskog društva za istraživanje vratne kralježnice 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Modične promjene na krajnjim pločama lumbalnog kralješka: prevalencija i povezanost s bolovima u donjem dijelu leđa i išijasom u sredovječnih muških radnika. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. i Dalinka, M. MRI promjena koštane srži u blizini završne ploče kod degenerativne bolesti lumbalne kralježnice. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, i Carter, JR Degenerativna bolest diska: procjena promjena vertebralne srži pomoću MRI. Radiologija 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS i Carter, JR Prikaz degenerativne bolesti diska. Radiologija 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Prediktori neovertebralne završne ploče (Modic) signaliziraju promjene u općoj populaciji. European Spine Journal: Službena publikacija Europskog društva za kralježnicu, Europskog društva za deformacije kralježnice i Europskog društva za istraživanje vratne kralježnice, Odjel 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010.).
Albert, HB i Mannisch, K. Modic promjene nakon lumbalne disk hernije. European Spine Journal : službena publikacija Europskog društva za kralježnicu, Europskog društva za deformacije kralježnice i Europskog društva za istraživanje vratne kralježnice 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M. i Kaapa, E. Modicove promjene tipa I mogu predvidjeti brzo progresivnu deformacijsku degeneraciju diska: jednogodišnja prospektivna studija. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ i Fan, SW Modicove promjene: mogući uzroci i doprinos degeneraciji lumbalnog diska. Medicinske hipoteze 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Interna ruptura diska. Problemi s prolapsom diska starijih od 50 godina. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Vrijeme objave: 13. prosinca 2024